Mga pangunahing tip para sa cryopreservation ng mga kultura ng cell

Mga pangunahing tip para sa cryopreservation ng mga kultura ng cell

Ipinagpapatuloy ng mga cell ang kanilang metabolismo sa panahon ng normal na mga aktibidad sa paglago, na nangangailangan ng pakikilahok ng iba't ibang mga protease. Kapag ang temperatura ay bumaba sa ibaba -70 ° C, ang mga protease ay tumigil sa pagtatrabaho. Samakatuwid, sa isang kapaligiran na may napakababang temperatura, ang mga cell ay maaaring ihinto ang kanilang mga aktibidad na metabolic at magpasok ng isang napakalaking estado na nagbibigay-daan sa pangmatagalang imbakan.

1. Mga Eksperimentong Materyales

Base material:

Pangunahing Culture Medium

Serum (maginoo FBS/NBS)

Ultrapure Workbench

Sterile Dimethyl Sulfoxide (DMSO)

Sterile PBS phosphate buffer salt solution

Pipetting Gun

Electric pipetting gun

Paghahanda ng mga eksperimento

a) Paghahanda ng solusyon sa pagyeyelo:

Pangkalahatang mga cell: 55% basal medium + 40% bovine serum (FBS/NBS) + 5% DMSO

Mga Vital Cell: 90% Bovine Serum (FBS/NBS) + 10% DMSO

Aliquot ang inihanda na solusyon ng cryopreservation sa isang 15 ml centrifuge tube [pugad] at mag -imbak sa 4 ° C para magamit sa ibang pagkakataon.

(b) Paghahanda ng mga cell na maging frozen:

Bago ang pagyeyelo ng mga cell, piliin ang mga cell na may mahusay na katayuan sa paglago at sa phase ng paglago ng logarithmic at palitan ang mga ito ng sariwang daluyan na 12-24 na oras bago nagyeyelo upang mapanatili ang kondisyon ng cell.

2. Pamamaraan sa eksperimentong

1. Alamin ang density ng mga cell na maging frozen, na halos 80%~ 90%. Gumamit ng isang pipette gun upang hangarin ang lumang daluyan, magdagdag ng sterile PBS upang hugasan ang mga cell ng 1-2 beses, at alisin ang natitirang daluyan sa kapaligiran ng kultura.

2. Magdagdag ng isang naaangkop na halaga ng trypsin o digestive juice upang payagan ang trypsin na pumasok sa mga cell, at ilagay ang mga ito sa incubator para sa panunaw. Alamin ang kondisyon ng mga cell sa ilalim ng mikroskopyo: ang cytoplasm ay umatras at ang mga cell ay hindi na konektado sa mga sheet. Sa puntong ito, idagdag ang solusyon sa paghinto upang ihinto ang proseso ng panunaw.

3. Dahan-dahang bubble ang mga cell na may tip upang makabuo ng isang suspensyon ng cell at sentripuge ang suspensyon ng cell sa 1000 rpm sa loob ng 3-5 minuto.

Itapon ang supernatant, magdagdag ng isang naaangkop na halaga ng pagyeyelo, at malumanay na pipette upang gawing pantay ang mga cell. Ayusin ang cell density na may cryopreservation medium upang gawin ang pangwakas na density 5 × 106/ml ~ 1 × 107/ml.

4. Gumamit ng isang pipette gun upang paghiwalayin ang mga cryogen tubes ayon sa inaasahang kapasidad, at gumamit ng isang awtomatikong capping machine upang cap at seal.

5. Ang karaniwang programa ng cryopreservation ay isang rate ng paglamig ng -1 ° C hanggang -2 ° C/min, at ang mga cell na magiging frozen ay maaaring unti -unting nagyelo ayon sa mga sumusunod na hakbang: temperatura ng silid → 4 ° C (20min) → - 20 ° C (30min) → -80 ° C ° C (magdamag) → pangmatagalang imbakan sa likidong nitrogen.

Maaari rin itong maiimbak nang direkta sa isang freezer sa -80 ° C magdamag at pagkatapos ay ilipat sa likidong nitrogen para sa imbakan.

Ang Yongyue Medical ay isang high-tech na negosyo na dalubhasa sa R&D, paggawa at pagbebenta ng mga biomedical consumable. Mga tip sa pipette, pipette, PCR plate, mga produkto ng cell culture at iba pang mga biological laboratory consumable. Ang Yongyue Medical ay karapat -dapat sa iyong tiwala at pagpili! Maligayang pagdating upang kumunsulta!