Ang detalyadong paliwanag ng reagent volatilization sa mga eksperimento sa PCR

Ang detalyadong paliwanag ng reagent volatilization sa mga eksperimento sa PCR.

Sa eksperimento ng PCR, pagkatapos ng pagdaragdag ng sistema ng reaksyon, maingat naming takpan ang talukap ng mata at paulit -ulit na kumpirmahin na ang takip ay sarado upang maiwasan ang reagent na pagkasumpungin. Ngunit kung minsan mayroon din kaming mga pag -aalinlangan: nakumpirma namin na ang takip ay mahigpit na sarado, ngunit pagkatapos makumpleto ang eksperimento, ang reagent ay mag -evaporate pa rin. ano ang dahilan?

Sa katunayan, ang reagent volatilization ay isa sa mga pinaka -karaniwang problema sa mga eksperimento sa PCR, at maraming mga kadahilanan na nakakaapekto sa reagent volatilization.

Ang pagsingaw ay tumutukoy na sa panahon ng eksperimento sa PCR, ang solusyon sa reaksyon ay sumingaw sa mataas na temperatura, at pagkatapos ay ang mga condense sa pader ng bote o tuktok na takip upang mabuo ang mga droplet ng tubig o mga patak ng tubig, o direktang umaapaw mula sa agwat ng hangin ng takip ng bote o pelikula, na nagreresulta sa isang pagbabago sa konsentrasyon ng solusyon sa reaksyon. Ang mga pagbabago, ang dami ng solusyon sa reaksyon ay nabawasan, at ang ilan kahit na sumingaw sa pagkatuyo, na nagreresulta sa hindi wastong mga eksperimento.

1. Mainit na presyon ng takip, temperatura

Sa mga eksperimento sa PCR, karaniwang pinainit namin ang takip upang maiwasan ang paghalay ng reagent na singaw. Ang temperatura ng pinainit na takip ay karaniwang mas mataas kaysa sa solusyon ng reaksyon upang maiwasan ang paghalay ng mga singaw.

Ang mga thermal cycler heating lids ay maaaring mahahati sa sumusunod na apat na uri: hindi nababagay na mga lids ng pag-init, nababagay na mga lids ng pag-init, mga adaptive na mga lids ng pag-init, at awtomatikong pag-init ng mga lids. Ang nababagay na pinainit na takip ay nagtatampok ng masikip na compression ng daliri. Kung hindi mahigpit na mahigpit, ang mga reagents ay mag -evaporate. Ang pagsingaw sa gilid ay maaaring mai -minimize sa pamamagitan ng pagtaas ng presyon sa pinainit na takip. Minsan ang pag -iwas ay maaaring kurutin ang tubo at i -twist ang knob. Sa ilalim ng normal na mga pangyayari, ang takip ng electric smart heating ay maaaring awtomatikong makita ang mga consumable ng iba't ibang mga taas, awtomatikong i -compress ang mga consumable, at ang presyon ay pantay at pare -pareho, sa gayon binabawasan ang reagent na pagsingaw at manu -manong mga error, at pagpapabuti ng kawastuhan at pag -uulit.

2. pagpapapangit ng mga consumable

Para sa mga pagtagas ng singaw, iniisip ng karamihan sa mga tao na ang mainit na presyon ng takip ay hindi sapat. Ang presyon ng mainit na takip ay napakahalaga, ngunit iyon ay isang aspeto lamang. Sa katunayan, ang mga consumable ay napakahalaga din.

Ang mga PCR orifice plate ay karaniwang gawa sa mga plastik na materyales, na nagpapalawak at nagbabago nang malaki pagkatapos na pinainit. Ang rate ng pagpapalawak ng thermal ng base ng metal na PCR na ginamit upang ilagay ang PCR orifice plate ay napakababa, at ang PCR orifice plate ay hindi maaaring mapalawak nang normal sa eroplano pagkatapos ng pagpapalawak ng thermal. Ginagawa ng nakaumbok na estado ang tuktok na takip ng init na hindi ganap na makipag -ugnay sa ibabaw ng PCR orifice plate, na nagreresulta sa hindi pantay na temperatura at presyon, na nagiging sanhi ng reagent na pagsingaw sa gilid ng PCR orifice plate, at nakakaapekto sa epekto ng pagtuklas ng PCR.

3. Ang mga consumable ay hindi mahigpit na selyadong

Ang higpit ng thermal takip at ang mga consumable ay hindi nangangahulugang ang takip ng tubo ng PCR ay mahigpit na sarado, at ang kalidad ng PCR na maayos na plato ay hindi pantay. Ang mga de-kalidad na consumable, ang ibabaw ng nozzle at ang takip ay makinis, at ang selyo sa likod ng takip ng kahon ay mabuti, at hindi madaling tumagas. Ang mga mas mababang mga consumable ay may hindi pantay na spout at mga linya ng radial, na madaling maging sanhi ng pagtagas o kahit na matuyo.

Samakatuwid, sa mga eksperimento sa PCR, subukang pumili ng mataas na kalidad at angkop na mga consumable. Kasabay nito, ang sistema ng reaksyon ay maaaring mapalawak upang mabawasan ang impluwensya ng pagsingaw ng system sa reaksyon.