Mga isyu sa pagbubuklod at kontaminasyon sa mga plate ng kultura ng multiwell

Naglo-load at paghawak ng mga plato ng multi-well cell culture:

Sinusundan din ng cell culture plate ang prinsipyo ng mahigpit na asepsis kapag nagsasagawa ng mga operasyon ng cell. Ang lahat ng mga operasyon ay dapat na pamantayan at pang -agham, at hindi magiging sanhi ng karagdagang epekto sa paglaki ng cell. Ang pinaka -karaniwang problema ay kung paano matiyak ang pagkakapareho ng mga cell pagkatapos ng pagdaragdag ng sample at mabawasan ang epekto ng pagbabago ng daluyan sa estado ng paglago ng mga cell.

Magtanong:
Ang mga lids ng 96 at 24-well culture plate o Petri pinggan ay napaka-maluwag, na maginhawa para sa bentilasyon, ngunit ang bakterya, amag at iba pang mga pollutant ay dumulas din?

Sagot:
Ang takip ay napaka-maluwag, na kabilang sa semi-bukas na kultura, at ang layunin nito ay upang mag-ventilate (sa katunayan, ito ay gawin ang CO2 sa labas ng ulam ng kultura na ganap na makipagpalitan ng ulam ng kultura at mapanatili ang halaga ng pH ng kultura daluyan).
Ang lahat ay may mga pakinabang at kawalan, na syempre pinatataas ang posibilidad ng polusyon. Bilang karagdagan, nagiging sanhi ito ng likido sa ulam na sumingaw, na kapansin -pansin para sa tumpak na dosis ng mga gamot. Samakatuwid, ang mga sumusunod na dalawang hakbang ay kinakailangan: a. Ang hangin sa incubator ay dapat na malinis (regular na ilaw ng ultraviolet, pag -scrub ng alkohol, at ang incubator ay dapat buksan at sarado nang kaunti hangga't maaari) b. Ang kahalumigmigan sa incubator ay dapat palaging itago sa 100% (ang lababo na may sterile distilled water na nakalagay sa incubator).
Tulad ng isang ulam na Petri, ito rin ay isang lalagyan na may baligtad na takip, at hindi ito marumi. Pangunahin dahil sa negatibong presyon ng daloy ng hangin na nabuo ng "L" na gilid ng takip, may mga microorganism na nakakabit sa alikabok, at ang alikabok na dala ng daloy ng hangin ay hindi maaaring dumaan sa gilid ng takip na bumubuo ng negatibong presyon. Ang epekto ng bentilasyon ay sa pamamagitan lamang ng pagsasabog ng hangin, at walang airflow na bubuo, kaya't huminga lamang ito at hindi tumagos sa bakterya.

Magtanong:
Gamit ang isang 24-well plate, may mga operasyon sa ilang mga balon (sa ultra-malinis na bench), at may mga cell na mai-kultura sa ibang mga balon. Nag -aalala ako na ito ay magiging sanhi ng kontaminasyon. Hindi ko alam kung ano ang dapat pansinin?

Sagot:
Kung ang operasyon ay na-standardize sa ultra-clean bench, dapat itong maging OK. Sa palagay ko maaari mong gamitin ang buong takip ng plate ng kultura, subukang ilantad lamang ang mga butas na pinatatakbo, at takpan ang iba pang mga butas na may mga takip.
Isaalang -alang ang komprehensibo bago gamitin at gamitin ang lahat ng mga butas; Kung kailangan mo lamang gumamit ng ilang mga butas, maaari mo lamang gamitin ang isang panig, at takpan ang natitira sa isang takip. Nasanay ako muna sa tamang butas (maginhawa ito upang magdagdag ng mga sample sa kanang kamay).

Kapag nagpapatakbo, gumamit ng ilang mga slide ng salamin upang itaas ang isang tabi ng board, huwag buksan ang takip nang lubusan, sa pangkalahatan ay walang problema.
Hindi pantay na pamamahagi ng cell at mga solusyon

Magtanong:
Ang mga cell ay inoculated sa plate ng kultura, at ang mga cell ay palaging nagtitipon sa peripheral na bahagi, kung paano haharapin ito?

Sagot:
Maaari ko bang tanungin kung paano halo -halong ang iyong mga cell? Ito ba ay pipetting o pag -alog ng plate ng kultura? Kung ito ang huli, at kung ito ay inalog sa isang bilog, malamang na ang mga cell ay itatapon sa peripheral na bahagi dahil sa puwersa ng sentripugal, na nagreresulta sa mas kaunting mga cell sa gitna. Mahigit sa apat na linggo!
Narito ang isang mahusay na paraan: bago linangin ang plate ng binhi, ilagay ang plate ng kultura sa incubator sa loob ng ilang oras ng saturation at pagkatapos ay ilabas ito. Ang puwersa ay dapat na magaan kapag nagtatanim ng mga cell. Ang pagdaragdag ng dahan -dahan ay nagbibigay -daan sa suspensyon ng cell na dumaloy sa mga balon ng plato, at ang mga kulturang selula ay karaniwang lumalaki nang pantay -pantay. Tandaan na hindi kailanman iling sa isang shaker, o ang iyong mga cell ay magkakasama tulad ng sinabi mo.
Ang mas maliit na butas ng butas ng plate ng kultura, mas malinaw na ang kababalaghan na ito ay. Ang hindi pangkaraniwang bagay na ito ay hindi maiiwasan para sa 24 at 96-well plate, dahil ang likido ay sumunod sa dingding upang ang solusyon sa kultura sa balon ay hindi bumubuo ng isang antas ng likido, ngunit ang periphery ay mataas, tulad ng isang malukot na salamin. Gayunpaman, kapag ginagamit ang dalawang uri ng mga plate na orifice, hindi posible na magdagdag ng sapat na dami ng solusyon sa kultura dahil sa pangangailangan para sa karagdagang interbensyon, upang ang mga cell ay lilitaw na "koleksyon ng gilid" kasama ang solusyon sa kultura. Ito ay nakasalalay sa kung anong mga tagapagpahiwatig na kailangan mong obserbahan. Kung ito ay MTT, ang immunohistochemistry ay makakaapekto sa mga resulta dahil sa paglalagay ng cell.
Kapag ang pagtunaw ng mga cell, bigyang pansin ang pipetting nang pantay upang maiwasan ang mga clumps ng cell, at ang dami ng solusyon sa kultura sa balon ay dapat sapat. Karaniwan, magdagdag ng sapat na solusyon sa kultura kapag inoculate, at baguhin ang solusyon nang isang beses kapag nagdaragdag ng interbensyon. Ang halaga ng solusyon sa kultura na idinagdag sa solusyon ng interbensyon ay katumbas ng dami ng solusyon sa kultura sa oras ng inoculation, sa kasong ito, ang kababalaghan ng "gilid set" ay mapapabuti, kaya maaari mo ring subukan ito.

Magtanong:
Ang ginawa ko ay ang eksperimento sa pagbuo ng plaka. Pinakamabuting ikalat ang mga cell sa isang pantay na layer. Karamihan sa mga butas ay maayos kapag ang virus ay inoculated, at ang ilan sa mga ito ay hindi pantay. Mayroong mahusay na pagkakaiba -iba sa pangkat ng cell. Nais kong tanungin ka kung anong pamamaraan ang ginagamit mo kapag nagdaragdag ng mga cell?

Sagot:
Ito ay kritikal na i-pipette ang mga cell sa isang solong-cell suspensyon pagkatapos ng panunaw! Siguraduhin na ang bilang ng mga cell sa bawat balon ay pare -pareho kapag naghahati ng plato!
Siyempre, mayroon ding mga kadahilanan sa pagproseso. Ang paralelismo sa pagitan ng mga balon ay napakahalaga din. Halimbawa, kapag nagdaragdag ng gamot, ihalo ang gamot pagkatapos ng pagbabanto upang matiyak na ang konsentrasyon ng bawat balon ay pare -pareho!
Bukod dito, kapag nagdaragdag ng mga cell at gamot, ang grupo ng pagsubok at ang control group ay dapat na maidagdag upang maiwasan ang pagkakaiba sa density ng cell at konsentrasyon ng gamot na dulot ng pagkakasunud -sunod ng pagdaragdag ng mga sample!

Magtanong:
Ang pamumulaklak ay pantay na, ngunit ang planking, 6 butas, at 24 na butas ay palaging medyo hindi pantay, at isang maliit na puro sa gitna. Bukod dito, malinaw na ang pagbibilang ay tapos na, at pagkatapos ng isang araw o dalawa, ang density ng bawat butas ay naiiba, na makakaapekto sa pagtuklas. Mayroon bang magandang paraan?

Sagot:
Kung gumagamit ka ng isang pipette ng pasteur, huwag masyadong sumuso sa bawat oras, dahil ang mga cell sa pipette ay awtomatikong lumulubog, madalas ang bilang ng Sundin ang ruta ng S-hugis.
Kung gumagamit ka ng isang pipette, ang mga tip ay dapat maproseso at alisin upang maiwasan ang pagsira sa mga cell, upang sa bawat oras na ang likido ay kinukuha ay tumutugma sa isang balon. Ito ay mas tumpak na magdagdag ng isang-sa-isang butas na may tip. Ngunit bigyang -pansin din ang paghahalo ng suspensyon.

Upang mag -set up ng isang kahanay na pangkat, ang n ay dapat na sapat na malaki (maaari mo itong kalkulahin).

Huwag iling pagkatapos ng kalupkop, dahil ang pag -ilog ay magiging sanhi ng mga cell na pinagsama -sama patungo sa gitna. Pinakamainam na plank isang beses.

Ang porous cell culture plate yongyue medikal ay palaging itinuturing na kalidad ng kontrol bilang buhay ng negosyo, at hinabol ang patuloy na pagpapabuti ng kompetisyon ng negosyo. Ang kumpanya ay palaging sumunod sa espiritu ng negosyo ng pagsunod sa mga batas at regulasyon, na mahigpit na may disiplina sa sarili, pagiging masigasig, at matapang na kumuha ng responsibilidad bilang pamantayan sa pagpapatakbo, pagpapanatili at pagpapalawak ng merkado na may mahusay na kalidad at mahusay na serbisyo, at matugunan ang mga pangangailangan ng mga customer sa pinakamalaking lawak. . Ang win-win sa mga customer ay ang aming layunin sa pag-unlad. Yongyue Medical! Ang iyong pinagkakatiwalaang kasosyo. Handa kaming makipagtulungan nang taimtim sa iyo upang lumikha ng isang mas mahusay na hinaharap.